二氨基联苯胺怎么溶于水

问题描述

精选答案

DAB，易溶于水，可制备成1%储存液，-20℃分装冻存。

然后使用前用合适pH的缓冲液（pH7.0~7.6）稀释到工作液，并与过氧化氢（H2O2）工作液混匀，即得到完整的DAB显色液。DAB即二氨基联苯胺（3,3’-diaminobenzidine），辣根过氧化物酶（Peroxidase）最常用的生色底物，其显色原理是在过氧化氢的作用下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕色不溶性产物，该反应灵敏度高、特异性好，常用于免疫组化、原位杂交、Western Blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。

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稀释方法：取去离子水920ul,加入B显色液40ul混匀，再加入40ul的A显色液，混匀后即可使用。工作液建议用量：免疫组化50-100ul/切片，WB每张膜200－5000ul/膜。

二氨基联苯胺（Diaminobenzidine,DAB）是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被广泛地用于蛋白印迹（Western Blot,WB)、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)、斑点印迹(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和显色反应。

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会计小妙招

使用前先用蒸馏水将B显色液（1:25）稀释为工作液，然后按比例（1:25）加入A显色液，混匀后立即使用。显色时间1-30分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色过程（一般3-10分钟最理想），并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。稀释方法：取去离子水920ul,加入B显色液40ul混匀，再加入40ul的A显色液，混匀后即可使用。工作液建议用量：免疫组化50-100ul/切片，WB每张膜200－5000ul/膜