微生物计数法

问题描述

精选答案

微生物计数的方法主要有两大类，一类是非培养的原位计数法，一类是培养后的计数法。

非培养的原位计数法，将适当稀释的菌悬液滴在细胞计数板上(2微升，需要体积准确)，在显微镜下，通过显微镜观察计数板每个小格子里的细胞数量，统计出计数板上所有的细胞量。再根据稀释倍数和液滴的体积计算出原样品中1毫升中含有多少细菌细胞。细菌细胞培养后计数方法有两种，一种是固体培养法(CFU)，另一种是液体培养法(MPN)。CFU法是梯度稀释培养法，将样品进行10倍的梯度稀释，通常环境样品稀释至10的-8次幂，细胞比较好的分散度。两所有的稀释样品取100微升均匀涂布在预制好的固体培养基平板上(2-3个平行)，然后置于适当的温度(一般是25-30°)培养过夜，观察所有的平板菌落生长情况，分散均匀的基本就是一个菌落就是一个细胞形成的，计数菌落就是样品中的细胞数量，计数平板选择生长数量在100个菌落左右的平板比较准确。将平板菌落数×稀释倍数就得到原环境细胞数量。MPN是细胞绝迹稀释法，将样品进行10倍的梯度稀释，稀释程度适当增加3-5个梯度，即一般稀释至10的-10至-12次幂。将每个稀释液分别取100微升转接入3个平行的液体培养基(3-5毫升)中，置于适当温度(一般25-30°)，过夜培养。观察所有的稀释培养试管，记录绝迹生长最后三个稀释度的情况，查MPN统计表，将查表数值×稀释梯度，获得原样品细菌细胞数量。最后说明，非培养的计数方法，是包含活细胞和死细胞的全部细胞的计数方法，而培养的计数方法，则是活细胞的计数方法。其中CPU法比MPN法准确，MPN法更具有现场操作的便捷性，各有优缺点，根据需要灵魂选择。