什么可以作为鉴定微生物的分子生物学指标

问题描述

精选答案

PCR技术

PCR技术的兴起是生物科学界的重要变革,它克服了原有技术的不足,使人类对微生物的研究有了大的进展，由于高度的特异性和敏感性PCR扩增技术已成为研究微生物的有力工具。

随着PCR技术的成熟一些更为先进和灵敏的方法应运而生,例如:实时荧光PCR,反转录PCR，触减PCR,嵌套PCR, 最小循环数PCR。其中实时荧光PCR可以定量测定微生物，此方法可以检测到扩增过程中任一时间反应物的变化 .它可用于测定提取总DNA中靶基因的含量。如果靶基因含量较高，扩增几个循环就能检测到产物。

反转录PCR（RT-PCR）中，用特殊的引物扩增可以得到大量的目的片段。RT-PCR是一种非常灵敏的扩增活性基因的方法，它还可以测出活性较大的基因,并可以找到含有大量RNA的活性细胞。在触减PCR (Touchdown-PCR)技术中,退火温度在每个连续的循环中持续降低1～2℃，退火的起始温度要比Tm高5～10℃,以后逐渐降低。起始扩增循环要在很严格的退火条件下进行,以后的扩增条件逐渐宽松这样可扩增出大量产物。此方法可以达到最理想的扩增效果而不需耗费时间。

最小循环数PCR(MCDP-PCR)技术可以找出能检测到微量产物的最少循环数，因此可以把循环数减少到最小以使反应受到的干扰也最小。

基因盒PCR(gene Cassette-PCR)技术靶向重组位点，因此内含子两侧的基因被用于探索环境基因群中的新基因。这种方法事先不需要知道基因的序列。