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考马斯亮蓝是干什么的
考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)是一种 用于蛋白质定量测定的化学物质。它是一种三苯甲烷类染料,可以与蛋白质形成较强的非共价复合体。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色,这种复合物在595nm波长下有最大光吸收值,因此可以用来对蛋白质进行定量测定。
考马斯亮蓝有G250和R250两种形式,其中G250在游离状态下呈红色,最大光吸收在465nm;R250则更多用于电泳蛋白的染色,染色灵敏度比氨基黑高5倍,可达0.1 µg蛋白。
在生化实验中,考马斯亮蓝常用于蛋白定量和蛋白电泳中的蛋白染色。其工作原理是通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力,考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。这种复合物稳定地携带负电荷,产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝法(Coomassie blue staining)又称Bradford法,是由Bradford于1976年建立的一种蛋白质浓度测定方法。这种方法适用于大多数蛋白质的定量,但对于小分子碱性多肽的定量(如核糖核酸酶或溶菌酶)可能不太适用。此外,去污剂的浓度超过0.2%可能会影响测定结果,例如TritonX-100、SDS、NP-40等。
总的来说,考马斯亮蓝是一种在生物化学实验中广泛使用的蛋白质染色剂,特别适用于蛋白质的定量测定和电泳染色。
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